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簡(jiǎn)要描述:過(guò)氧化氫(H2O2)測(cè)試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:LB肉湯 英文名稱:LB Broth 產(chǎn)品規(guī)格:250g LB營(yíng)養(yǎng)瓊脂 英文名稱:LB Nutrient Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g 苯丙脫氨 英文名稱:Phenylalanine Deaminase Medium 產(chǎn)品規(guī)格:1ml*20 伊紅美藍(lán)瓊脂(EMB) 英文名稱:Eosin-Methylene Blue Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:過(guò)氧化氫(H2O2)測(cè)試盒微量法
產(chǎn)品規(guī)格:100管/96樣
檢測(cè)方法:微量法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6408
產(chǎn)品分類:氧化與抗氧化系列
商品介紹:
測(cè)定意義: H2O2是生物體內(nèi)最常見(jiàn)的活性氧分子,主要由SOD和XOD等催化產(chǎn)生,由CAT和POD等催化降解。H2O2不僅是重要的活性氧之一,也是活性氧相互轉(zhuǎn)化的樞紐。一方面,H2O2可以直接或間接地氧化細(xì)胞內(nèi)核酸,蛋白質(zhì)等生物大分子,并使細(xì)胞膜遭受損害,從而加速細(xì)胞的衰老和解體;另一方面H2O2也是許多氧化應(yīng)急反應(yīng)中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。 測(cè)定原理: H2O2與硫酸鈦生成黃色的過(guò)氧化鈦復(fù)合物,在415nm有特征吸收。 需自備的儀器和用品: 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、丙酮60mL、濃鹽酸10mL、研缽和冰。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
10mg 氨甲喋呤 Amethopterin -20℃保存
2 ug pFLAG-CMV-3 pFLAG-CMV-3 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
四硫磺酸鈉亮綠培養(yǎng)基(TTB) Tetrathionate Broth Base 250g
1瓶 Ehrlich細(xì)胞株 Ehrlich 低溫運(yùn)輸和保存
VRB-MUG瓊脂 100g
10000U MMLV逆轉(zhuǎn)錄 MMLV Reverse Transcriptase -20℃保存
250mL Phosphate Buffer,0.5M, pH7.0 Phosphate Buffer,0.5M, pH7.0 常溫保存
20次 一站式TA克隆試劑盒(含感受態(tài)) One-Stop AT Cloning Kit -20℃保存
2 ug pAP-1-Luc pAP-1-Luc 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
200 mL 大鼠淋巴細(xì)胞分離液1.083 Cell Separation Solution -20℃保存
1瓶 VERO C1008(E6)細(xì)胞株 VERO C1008(E6) 低溫運(yùn)輸和保存
過(guò)氧化氫(H2O2)測(cè)試盒微量法PRMT6 組蛋白甲基轉(zhuǎn)移6抗體 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-chicken IgG/Cy5.5 Cy5.5標(biāo)記的兔抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml
IGFALS/ALS 胰島素樣生因子酸不穩(wěn)定亞基ALS抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-Tau protein(Ser404) 磷酸化微管相關(guān)蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Phospho-Jak3 (Tyr785) 磷酸化蛋白酪激JAK-3抗體 規(guī)格: 0.1ml
SCN11A/NAV1.9 鈉通道蛋白11α抗體 規(guī)格: 0.2ml
GNRPX/PLEKHJ1 核苷酸結(jié)合蛋白X抗體 規(guī)格: 0.2mlRabbit Anti-mouse IgM/Bio 標(biāo)記的兔抗小鼠IgM 規(guī)格: 0.3ml
PERK 蛋白激樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激抗體 規(guī)格: 0.2mlG3BP1 Ras GTP活化蛋白結(jié)合蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-IRS1(Thr176) 磷酸化胰島素受體底物1抗體 規(guī)格: 0.1mlACADVL ?;oA脫很鏈抗體 0.2ml
SEMA4D/CD100 臂板蛋白4D抗體 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Bovine IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗牛IgG 規(guī)格: 0.1ml
human Fibrinogen 抗體 規(guī)格: 0.2mlFactor X 凝因子10抗體 規(guī)格: 0.2ml
Somatostatin/GRIH 生抑素抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Ack1(Tyr326) 磷酸化Ack1抗體 0.1ml
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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