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簡要描述:β半乳糖苷酶(βGAL)測(cè)試盒微量法公司正在出售的產(chǎn)品:松三糖-雙岐桿菌鑒定 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:20支 棉子糖-雙岐桿菌鑒定 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:20支 醇-雙岐桿菌鑒定 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:20支 淀粉-雙岐桿菌鑒定 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:20支
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本試劑盒僅供研究使用公司實(shí)驗(yàn)室提供免費(fèi)代測(cè),7個(gè)工作日出結(jié)果,提供原始數(shù)據(jù)!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 檢測(cè)方法 | 貨號(hào) |
β半乳糖苷酶(βGAL)測(cè)試盒微量法 | 100管/48樣 | 微量法 | BK-01S6749 |
商品介紹:
測(cè)定意義: β-GAL(EC 3.2.1.23)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,能夠催化β半乳糖苷化合物中β半乳糖苷鍵水解,此外還具有轉(zhuǎn)半乳糖苷的作用。β-GAL不僅可為植物的快速生長釋放儲(chǔ)存的能量,還能在正常的多糖代謝、細(xì)胞壁組分代謝以及衰老時(shí)細(xì)胞壁降解過程中催化多糖、糖蛋白以及半乳糖脂末端半乳糖殘基的水解,釋放自由的半乳糖。 測(cè)定原理: β-GAL分解對(duì)-硝基苯-β-D-吡喃半乳糖苷生成對(duì)-硝基,后者在400nm有最大吸收峰,通過測(cè)定吸光值升高速率來計(jì)算β-GAL活性。 自備用品: 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑組成和配制:
提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 5 mL×1 瓶,4℃避光保存。
試劑二:液體 15 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
試劑四:液體 3 mL×1 瓶,4℃保存。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果判斷我有妙招:
1、定量測(cè)定結(jié)果根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測(cè)物的含量。
2、以樣品孔的OD值大于陰性對(duì)照OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
3、以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或等于2.1為陽性,P/N值小于2.1,但大于1.5為可疑,P/N小于1.5為陰性。
4、ELISA試劑盒目測(cè)定性法:加入底物經(jīng)酶解和終止反應(yīng)后,肉眼觀察陽性孔顏色明顯深于(競(jìng)爭(zhēng)法則淺于)陰性對(duì)照,與陰性對(duì)照的顏色接近者,判定為陰性。
與您分享常用不穩(wěn)定試劑的分類及要求:
① 易揮發(fā)、低燃點(diǎn)的試劑要密封,放于陰涼、通風(fēng)、遠(yuǎn)離火源處保存。
② 與水蒸氣,水發(fā)生反應(yīng)的物質(zhì)要密封,并遠(yuǎn)離水源保存。
③ 易與氧氣作用的試劑,應(yīng)將其固體或晶體密封保存,不宜長期存放其水溶液,亞硫酸,氫硫酸溶液要密封存放,鉀,鈉,白磷更要采用液封形式。
④ 與二氧化碳反應(yīng)的物質(zhì)要密封保存,其相應(yīng)的溶液較固體更易反應(yīng),所以更要注意密封保存。
⑤ 易揮發(fā)或自身分解的試劑要密封,放于陰涼通風(fēng)處保存。
操作步驟:
1. 樣品的準(zhǔn)備:
a. 細(xì)胞樣品的準(zhǔn)備:收集細(xì)胞,用4 ℃或冰浴預(yù)冷的PBS 或生理鹽水洗滌1-2遍。沉淀用預(yù)冷組織細(xì)胞裂解液4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。
b. 組織樣品的準(zhǔn)備:動(dòng)物用生理鹽水(0.9% NaCl ,含有0.16mg/ml) 灌流清除血液后獲取組織樣品。按照每100mg加入500-1000ul組織細(xì)胞裂解液比例, 4 ℃或冰浴勻漿( 可以使用玻璃勻漿器或各類常見電動(dòng)勻漿器) 。隨后勻漿液4 ℃離心,取上清作為待測(cè)樣品。
d. 使用BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒(P1511)測(cè)定蛋白濃度。通常10-20ug蛋白的細(xì)胞或組織勻漿液樣品中SOD平均活力約1個(gè)活力單位左右(不同細(xì)胞和組織的差異會(huì)比較大,該活力范圍僅作為初步的參考) 。每種樣品準(zhǔn)備20-100 ug蛋白量通常已經(jīng)足夠用于后續(xù)檢測(cè)。
e. 根據(jù)蛋白濃度和預(yù)計(jì)的蛋白使用量,用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液適當(dāng)稀釋樣品。例如,小鼠肝臟通常需要稀釋10-100 倍。準(zhǔn)備好的樣品如果當(dāng)天測(cè)定,可以冰浴保存;如果當(dāng)天不能完成測(cè)定,可以-70 ℃凍存,但建議盡量當(dāng)天完成測(cè)定。
2. 試劑盒的準(zhǔn)備工作:
a. WST-8酶工作液的配制: 參照下表,根據(jù)待檢測(cè)樣品(包括標(biāo)準(zhǔn)品) 數(shù)量,配制適量WST-8酶工作液,配制好的WST-8酶工作液4 ℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
注意:由于酶溶液的用量較少且易沉降,必須注意在使用前先輕輕離心一下,然后適當(dāng)混勻后再使用。
b. 反應(yīng)啟動(dòng)工作液配制:將試劑盒提供的反應(yīng)啟動(dòng)液 (40X) 溶解后混勻,按1μl 反應(yīng)啟動(dòng)液(40X) 加入39μl SOD 檢測(cè)緩沖液的比例進(jìn)行稀釋,即為反應(yīng)啟動(dòng)工作液。4℃或冰浴保存,可當(dāng)天使用,但建議盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。
c. (可選做) SOD 標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備:需自備SOD標(biāo)準(zhǔn)品,用本試劑盒提供的稀釋液將SOD標(biāo)準(zhǔn)品稀釋至如下系列濃度:20U/ml,10U/ml ,5U/ml,2.5U/ml,1.25U/ml,0.625U/ml。在隨后的檢測(cè)中可以各取20微升,參考樣品進(jìn)行檢測(cè)。說明:為避免稀釋后SOD酶活性的下降, SOD標(biāo)準(zhǔn)品宜現(xiàn)稀釋現(xiàn)使用;本試劑盒對(duì)于SOD的檢測(cè)并不需要SOD作為標(biāo)準(zhǔn)品,但可以使用SOD標(biāo)準(zhǔn)品作為陽性對(duì)照或作為對(duì)SOD活性定量的參考。
OGY瓊脂 OGY Agar 250g
1g Lysozyme, Egg White -20℃保存
50T 毛滴蟲PCR檢測(cè)試劑盒 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
5mL 髓核細(xì)胞生長因子 Growth Factor For Cell Culture -20℃保存
500mL Blotto-Antifoam in TBS with azide Blotto-Antifoam in TBS with azide 常溫保存
50次 DNA電泳分子量標(biāo)準(zhǔn)(pUC19/MspI) DNAMETER(3) 4℃保存
500mL Wash Buffer,pH8.0 Wash Buffer,pH8.0 常溫保存
支原體肉湯培養(yǎng)基 Mycoplasma Broth Medium 250g
1瓶 Fox-NY細(xì)胞株 Fox-NY 低溫運(yùn)輸和保存
含225ml7.5%氯化鈉肉湯均質(zhì)袋 7.5% NaCl Broth 10個(gè)/包
500 U 限制性內(nèi)切DpnI Restriction Endonuclease -20℃保存
β半乳糖苷酶(βGAL)測(cè)試盒微量法phospho-p95 NBS1(Ser343) 磷酸化滑膜細(xì)胞凋亡抑制物1抗體 規(guī)格: 0.1ml
α-TAT α微管蛋白乙酰轉(zhuǎn)移1抗體 規(guī)格: 0.2ml
SSTR5 生抑素受體5抗體 規(guī)格: 0.1ml
Nrn1/Cpg15/Neuritin 轉(zhuǎn)化神經(jīng)突起蛋白抗體 規(guī)格: 0.2ml
ADCY2 苷酸環(huán)化2抗體 0.2ml
TNFSF9 瘤壞死因子配體超家族成員9抗體 規(guī)格: 0.1ml
RING2/RNF2 環(huán)指蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Kinesin 驅(qū)動(dòng)蛋白KNS1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-Goat IgG 兔抗羊IgG 規(guī)格: 1mg
PON1 芳香酯1(對(duì)氧磷)抗體 規(guī)格: 0.1ml
HEPACAM2 肝細(xì)胞粘附分子2抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-KMT6/EZH2(Thr487) 磷酸化抑蛋白EZH2抗體 規(guī)格: 0.1ml
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