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簡(jiǎn)要描述:土壤脫氫酶(SDHA)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法公司正在出售的產(chǎn)品:BETA-SSA 瓊脂進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)BETA-SSA Agar用于鏈球菌的選擇性分離培養(yǎng)(ACUMEDIA方法)250改良Y 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Agar Y,Modified用于分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌 (GB標(biāo)準(zhǔn))250改良鹽緩沖液PSB 進(jìn)口、國(guó)產(chǎn)Phosphate Saline Buffer,Modified用于小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌冷增
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱:土壤脫氫酶(SDHA)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣
檢測(cè)方法:可見(jiàn)分光光度法
產(chǎn)品貨號(hào):BK-01S6844
產(chǎn)品分類:土壤系列
商品介紹:
測(cè)定意義: 土壤脫氫酶(Soil dehydrogenase, sDHA)的活性可以反映土壤體系內(nèi)活性微生物量以及其對(duì)有機(jī)物的降解活性,可以作為土壤微生物的降解性能指標(biāo)。 測(cè)定原理: 氫受體2, 3, 5 - 氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyl Tetrazolium Chloride, TTC)在細(xì)胞呼吸過(guò)程中接受氫以后,被還原為三苯基甲鐟(Triphenyl Formazone, TF),TF呈現(xiàn)紅色,在波長(zhǎng)485nm處有最大吸收峰,采用分光光度法于485nm測(cè)定其吸光值,即得土壤脫氫酶活性。 自備實(shí)驗(yàn)儀器及用品: 篩子、天平、恒溫培養(yǎng)箱或水浴鍋、低溫離心機(jī)、漏斗,濾紙、可見(jiàn)分光光度計(jì)、玻璃比色可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、1 mL玻璃比色皿/96孔板、冰、蒸餾水、丙酮(不允許快遞,請(qǐng)用戶自備)。 |
所需的儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本: 取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行 勻漿(或使用各類常見(jiàn)勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。 【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
| ② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本: 先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。 【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10 4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。 |
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA及。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。
抗生素5號(hào) Antibiotic NO.5 250g
1瓶 D341 Med細(xì)胞株 D341 Med 低溫運(yùn)輸和保存
含TSA平板(7cm) Tryptose Soya Agar 10個(gè)/包
10U ATP硫酸化 ATP Sulfurylase -20℃保存
500mL PIPES Buffered Saline,5X,pH7.0 PIPES Buffered Saline,5X,pH7.0 常溫保存
1g 氨芐干粉 Ampicillin Powder 4℃保存
2 ug pPink LC pPink LC 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
葡萄糖發(fā)酵管 20支
2 ug pMSCV-puro pMSCV-puro 低溫運(yùn)輸,-20℃保存
mCPC mCPC Medium 250g
25g L- 鹽酸鹽 L-Histidine HCl 室溫干燥保存
土壤脫氫酶(SDHA)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法EMP3 上皮細(xì)胞膜蛋白3抗體 規(guī)格: 0.2mlELL2 聚合延伸因子2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Donkey Anti-Guinea pig IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的驢抗豚鼠IgG 規(guī)格: 0.1mlPhospho-Bad(Ser118) 磷酸化相關(guān)死亡促進(jìn)因子抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-c-Jun(Tyr170) 磷酸化原基因c-Jun抗體 規(guī)格: 0.1mlbeta 2 Microglobulin β2微球蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
Mouse Anti-human IgG(3D3)/Cy3 Cy3標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體 規(guī)格: 0.1mlPhospho-HER4 (Tyr1162) 磷酸化HER4抗體 規(guī)格: 0.1ml
CK15 細(xì)胞角蛋白15抗體 規(guī)格: 0.1mlCYP24A1 細(xì)胞色素P450 24A1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Mast Cell Tryptase 肥大細(xì)胞蛋白7抗體 規(guī)格: 0.1mlFactor VII light chain 凝因子VII 規(guī)格: 0.2ml
RABGAP1 Rab蛋白GTP激活蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2mlCOX7A2 氧化VIIA亞型2抗體 0.1ml
Phospho-Insulin Receptor Beta(Tyr1185) 磷酸化胰島素受體β抗體 規(guī)格: 0.1mlCollagen VII 7型膠原抗體 規(guī)格: 0.1ml
phospho-EPH A3+A4+A5 ( Tyr779) 磷酸化內(nèi)皮細(xì)胞受體蛋白酪激A3+A4+A5抗體 規(guī)格: 0.1ml
SPARCL1/Ecm2 細(xì)胞外基質(zhì)蛋白2抗體 規(guī)格: 0.2ml
Phospho-NMDAR1(Ser897) 磷酸化谷受體1抗體 規(guī)格: 0.1ml
FDC-SP/ADC 濾泡樹(shù)突細(xì)胞分泌蛋白抗體 規(guī)格: 0.1ml
注意事項(xiàng):
1、試劑二為酶,不可冷凍,使用時(shí)在冰上放置。
2、對(duì)照管只需要做一管。
3、若對(duì)照管吸光值大于2,建議將試劑二用蒸餾水稀釋7倍后使用(10μl試劑二原液+60μl蒸餾水)。
4、SOD為什么有的樣本測(cè)定管大于對(duì)照管,對(duì)照管數(shù)值在什么范圍?
對(duì)照管的范圍是0.8-2。對(duì)照管吸光值過(guò)低可能是(1)試劑二或試劑四沒(méi)有現(xiàn)配現(xiàn)用;(2)沒(méi)有按順序加試劑;(3)反應(yīng)時(shí)間不夠,可以延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間(反應(yīng)時(shí)間30min可以延長(zhǎng)到40min)。對(duì)照管吸光值過(guò)高可能是試劑二未按操作說(shuō)明書(shū)稀釋相應(yīng)倍數(shù)。
若出現(xiàn)測(cè)定管大于對(duì)照管,可能是樣本中雜質(zhì)的影響太大,為了降低雜質(zhì)的影響一般將樣本提取上清液用蒸餾水或提取液稀釋10倍后再測(cè),通常可以使測(cè)定正常。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
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