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簡要描述:胰島素elisa試劑盒測定步驟加樣:1. 除包被外都需45度加樣;2.加樣體積要準確;3.管底加樣,不能加在管壁上;4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡。
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產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
人胰島素原(PI)elisa試劑盒說明書 | Human proinsulin (PI) ELISA Kit | BKH7371 |
試劑配制:
1、酶聯(lián)板(Assay plate ):一塊(96孔或者48孔)。
2、標(biāo)準品(Standard):2瓶(凍干品)。
3、樣品稀釋液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4、標(biāo)記抗體稀釋液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6、標(biāo)記抗體(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7、辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。
9、濃洗滌液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10、終止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
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實驗標(biāo)準品圖:
40 ng/L,5號標(biāo)準品,150μl的原倍標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
20 ng/L,4號標(biāo)準品,150μl的5號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
10 ng/L,3號標(biāo)準品,150μl的4號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
5 ng/L,2號標(biāo)準品,150μl的3號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
2.5 ng/L,1號標(biāo)準品,150μl的2號標(biāo)準品加入150μl標(biāo)準品稀釋液
測定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當(dāng)時,即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應(yīng)步驟,但卻 是決定實驗成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測定結(jié)果,準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
肝細胞HBV病毒株枯草芽胞桿菌 Bacillus subtilis
豬霍亂沙門氏菌 Salmonella cholerae-suis嗜熱鏈球菌 Streptococcus thermophilus
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